ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения технологической разработки.

Микотоксины являются вторичными метаболитами микроскопических грибов, в течении последних 30-40 лет они признаны одними из наиболее вредных для здоровья человека и животных. Потенциальная и реальная опасность микотоксинов значительно усиливается их высокой стабильностью к различным неблагоприятным воздействиям, к которым относятся кипячение, обработки минеральными кислотами, щелочами и другими реагентами. И не случайно микотоксины введены в перечень регламентированных в пищевых продуктах, кормах и сырье. К числу наиболее распространенных токсинов относятся патулин, охратоксин, афлатоксин и другие. Они загрязняют зерно, овощи, плоды и продукты их переработки, корма, солод, пиво, соки и вино.

В винодельческой продукции ранее находили патулин, а в последнее время появилась информация о содержании охратоксина А. Очевидно, исходя из того, что он является продуцентом грибов из родовPenicilliumиAspergillus, а эти грибы вызывают гниение винограда во время затяжных дождей.

Международное агенство по изучению раковых заболеваний классифицировало охратоксин как потенциальное канцерогенное вещество и отнесло его к классу опасности 2В. При загрязнении пищевых продуктов охратоксинами человек заболевает балканской эндемической нефропатией.

Существующие методы как выделения, так и определения микотоксинов подчас исключительно сложны, трудоемки и не отвечают запросам массового анализа. В связи с этим нами разработан метод определения охратоксина в виноградном вине методом тонкослойной хроматографии.

Тонкослойная хроматография - (ТСХ) - разновидность жидкостной хроматографии в плоском с одной стороны слое сорбента, нанесенном на твердую подложку. Основные особенности ТСХ определяются движением элюента (растворителя) по слою сорбента за счет капиллярных сил, что предопределяет простоту и легкость проведения хроматографического процесса. Применение универсального сорбента - силикагеля и открытый слой обеспечивают легкость нанесения пробы, возможность одновременного анализа нескольких проб, простоту наблюдения за процессом элюирования.

Для анализа микотоксинов методом ТСХ применяют двумерную или ступенчатую хроматографию. Первая ступень, или первое направление элюирования, является процессом очистки, отделения мешающих определению вещества, а на второй ступени осуществляют разделение микотоксинов.

Преимущество метода состоит не только в его простоте, доступности, возможности применения специфических - проявляющих агентов, подтверждающих принадлежность вещества к искомому, меньших требованиях, предъявляемых к очистке экстрактов, но и в возможности определения малых количеств охратоксина (предел обнаружения составил в наших опытах 0,1 мкг/см ³).

Согласно предлагаемому методу для определения микотоксина охратоксина А в вине и виноматериалах 10 см ³ образца пропускают черезпатрон Диапак С16МТ (концентрируют пробу в 10 раз) и окончательно очищают 1 см ³ ацетонитрила. Полученный экстракт в количестве 5 мм ² и стандарт наносят на пластины для тонкослойной хроматографии и проводят хроматографическое разделение в подготовленной хроматографической камере с соответствующими элюентами (растворителями). Наиболее оптимальной для разделения микотоксина оказалась система растворителей в виде изопропанола и аммиака. Она достаточно летуча и имеет небольшое значениеRf(коэффициент удерживания) на сорбенте. Проявление пятен микотоксина проводили с помощью облучения длинноволновым ультрафиолетовым светом (с длиной волны 365 нм). Под действием УФ лучей пятна микотоксина светятся зелено-голубым светом.

Идентификацию и количественное определение охратоксина проводили методом сканирующей денсометрии на денситометре "Сорбфил" со специализированной программой обработки результатов анализа и расчета параметров хроматограмм.

Использование денситометра позволило получить методом ТСХ количественные результаты, сопоставимые по разрешающей способности с ВЭЖХ, сохраняющим, однако, все преимущества ТСХ.

Предлагаемая методика апробирована на образцах вина с предварительным внесением определенных количеств охратоксина и позволяет быстро и точно контролировать содержание охратоксина в винодельческой продукции.