ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Трихинеллез, возбудителем которого является мелкий круглый червь, локализующийся в поперечно-полосатой мускулатуре многих видов животных и человека, представляет наиболее опасное паразитарное заболевание. Поэтому разработка и внедрение методов прижизненной диагностики трихинеллеза представляет актуальную проблему для ветеринарии и медицины. Одним из таких методов является метод с использованием аллергена.

Аллерген представляет собой полисахаридные комплексы мышечных личинок трихинелл, выделенные путем механической гомогенизации и воздействия ультразвука.

Извлечение водорастворимых белков из живых или замороженных личинок трихинелл проводится механической гомогенизацией в стеклянном микрогомогенизаторе в течение 10 минут при температуре 0 ⁰С и частоте вращения 200 об/мин. В дальнейшем фрагменты разрушаются ультразвуком с амплитудой колебания волновода 30+10 мкм в три приема по 30 сек с интервалом в 1 минуту. Затем гомогенат в соотношении 1:5 осадка к раствору в 0,25%-ном растворе трипсина при температуре 37 ⁰С выдерживают в термостате в течение 2 часов. Отмывают фосфатно-солевым раствором рН 7,3 и центрифугируют при 0 ⁰С и частоте вращения 6000 об/мин в течение 40 минут. Затем массу помещают в искусственный желудочный сок в соотношении 1:2 для переваривания в термостате при температуре 30 ⁰С на 18 часов.

Осадок отмывают стерильным фосфатно-солевым буфером трижды, центрифугируя его при 6000 об/мин, при температуре 0 ⁰С в течение 40 минут. Объем осадка разводят стерильным фосфатно-солевым буфером рН 7,3 в 200 раз. Полученную эмульсию разводят по объему двойным количеством стерильного 8%-ного раствора сахарозы, разливают в стерильные флакончики по 10-20 мл. В каждый флакончик добавляют по 1 мл среды высушивания, замораживают в жидком азоте.

Подготовленные таким образом флаконы с препаратом в замороженном состоянии помещают в камеру для лиофильной сушки. Леофилизацию проводят в вакууме по соответствующей схеме, флаконы с высушенным препаратом закрывают резиновыми пробками, покрывают алюминиевыми колпачками и закрывают на закаточной машине.

Готовый препарат представляет собой сухую аморфную массу белого цвета.

При внутрикожном введении инжекторным способом в разведении 1:10 при помощи безигольного инъектора аллерген у зараженных трихинеллами животных вызывает положительную кожную реакцию. Аллерген вводится в дозе 0,2 мл в верхнюю поверхность ушной раковины. Реакцию учитывают через 30, 60, 90 и 120 минут после введения. Местная реакция проявляется первые 15-20 минут (реакция немедленного типа) и сохраняется до 120 минут. Схема учета реакции.

Отрицательная реакция - отсутствие или незначительное покраснение от механического воздействия. Припухлость кожи на месте введения аллергена 4х4 мм.

Сомнительная реакция - покраснение. Припухлость участка кожи на месте введения аллергена до 8х8 мм.

Положительная реакция - значительное покраснение. Припухлость участка кожи на месте введения аллергена (папула) 10х10 мм, более чем в два раза превышающая размер папулы в контроле. Сохраняется до 90-120 минут.

Аллерген может быть использован для массовых эпизоотологических обследований в хозяйствах, неблагополучных по трихинеллезу. Результат получают в течение нескольких часов.