ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Метод относится к области ветеринарной диагностики и может быть использован для экспресс-определения каталазной и/или пероксидазной активности суспензий различных микроорганизмов, а также сыворотки крови и гомогенатов различных органов животных. Применение этого метода позволяет при моделировании антимикробной терапии на подопытных животных осуществить правильный выбор дозы лекарственного препарата, если действие его основано на ускорении перекисного окисления липидов в микроорганизмах.

Настоящий метод представляет собой модификацию метода Панина-Щирской в применении для косвенного определения каталазы. Традиционный метод Панина-Щирской предназначен для определения концентрации перекисных соединений в растворах по цветной реакции в присутствии диметилпарафенилендиамина. Принцип этого метода основан на том факте, что перекисные соединения разлагают йодид калия с выделением свободного йода, который, в свою очередь, дает с диметилпарафенилендиамином окрашивание красного тона (от розового до малинового в зависимости от концентрации).

Нами этот принцип применен для косвенного определения каталазно-пероксидазной активности биологических проб. В присутствии каталазы и/или пероксидазы при добавлении избытка перекиси водорода, последняя частично разлагается данными ферментами. Непрореагировавшая по этой реакции перекись и определяется диметилпарафенилендиаминовым методом. Затем проводят расчет.

Ход анализа: к 0,1 мл биологической пробы (сыворотки, микробной суспензии или гемолизата тканей подопытных животных) прибавляют 1 мл 1% водного раствора йодида калия, 1 мл 1% водного раствора уксусно-кислого натрия и 1 мл 0,03% водного раствора перекиси водорода.

Стандартный 0,01 н раствор йода служит для приготовления калибровочной серии. Для этого 0,42 мл раствора помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят водой до метки. Из этого раствора готовят калибровочную серию (см.таблицу):

Затем во все пробирки шкалы и в пробу добавляют по 0,5 мл 0,02% раствора диме­тилпарафенилендиамина в 0,1 н растворе соляной кислоты и через 10 мин. колориметрируют на ФЭК в кювете 10 мм, со светофильтром 490 нм.

Таким образом может быть определена концентрация каталазы и/или пероксидазы от 1,0 нг/мл и выше, т.е. метод может быть рекомендован для определения каталазно-пероксидазной активности сыворотки крови, гомогенатов различных органов подопытных животных, а также различных бактериальных суспензий.