ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Метод относится к области ветеринарной диагностики и может быть использован для экспресс-определения каталазно-пероксидазной активности суспензий различных микроорганизмов, а также сыворотки крови и гомогенатов различных органов подопытных животных. Применение этого метода позволяет при моделировании антимикробной терапии на подопытных животных осуществить правильный выбор дозы лекарственного препарата, если действие его основано на ускорении перекисного окисления липидов в микроорганизмах. Ценность данного метода - применение в качестве реактивов обычных, общедоступных химических реактивов, а в качестве анализатора -стандартного фотоколориметра (типа ФЭК).

Принцип метода основан на том факте, что многие каталитические процессы с участием оксидоредуктаз (в том числе разложение ими перекиси водорода) могут быть остановлены добавлением молибдата аммония. В предлагаемом нами методе используется цветная реак­ция молибдата аммония с перекисью водорода.

Реакция запускается добавлением 2 мл 0,03% перекиси водорода к 0,1 мл сыворотки кро­ви. В холостую пробу в таком же объеме вместо перекиси водорода добавляют воду. Реакцию останавливают через 10 минут добавлением 1 мл 4% раствора молибдата аммо­ния. Интенсивность полученной окраски измеряют на ФЭК при светофильтре с максимумом пропускания в зоне 410 нм против холостой пробы. Калибровочный график строят с по­мощью серии, содержащей известную концентрацию пероксидазы хрена.

Если исследуют органы и ткани подопытных животных, соответственно, готовят гомогенат (из расчета 100 мг ткани на 1 мл трис-HCl- буфера), и для анализа берут 0,1 мл этого гомогената.

Активность каталазы рассчитывают по формуле

Е = (Ахол -Aoп)ЧVЧtЧК [мкат/л] ,

где Е - активность каталазы

(Ахол - Аоп) - разность экстинкций холостой и опытной проб

V-объем пробы (0,1 мл)

t- время инкубации, 600 с

К - коэффициент миллимолярной экстинкций перекиси водорода =

= 22,2Ч10 ³ мМ ^-1см ^{-1 .}

Таким образом может быть определена концентрация каталазы или пероксидазы от 0,6 нг/мл и выше, т.е. метод может быть рекомендован для определения каталазно-пероксидазной активности сыворотки крови, гомогенатов различных органов подопытных животных, а также различных бактериальных суспензий.