ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Метод относится к области ветеринарной диагностики и может быть использован для экспресс-определения каталазной и пероксидазной активности различных микроорганизмов (в их суспензиях).

Каталазы и пероксидазы - одни из важнейших ферментов, предотвращающих перекисное окисление липидов. Эти ферменты продуцируются как клетками многих тканей орга­низма человека и теплокровных животных, так и многими микроорганизмами. А поскольку ряд методов антимикробной терапии направлен именно на ускорение перекисного окисления липидов в микроорганизмах, особое значение имеет подбор такой дозы препарата, при кото­рой активность микроорганизмов подавлялась бы, но клетки организма при этом не повреждались. Поэтому особое значение имеет разработка метода количественной оценки каталазной и пероксидазной активности микроорганизмов.

Реактивы:

- ацетатный буфер (рН - 4,9), получаемый смешиванием 0,2 М растворов уксусной ки­слоты и ацетата натрия в соотношении 3,5:6,5;

- индигокармин (0,0233 г в мерной колбе, долить до 100 мл дистиллированной водой);

- 0,03 М раствор перекиси водорода (0,33 мл 30% перекиси водорода, довести дистил­лированной водой в мерной колбе до 100 мл);

- 20% серная кислота.

Ход работы: налить в пробирку 1 мл ацетатного буфера, 1 мл индигокармина, 0,5 мл про­бы, представляющей собой суточную культуру исследуемого микроорганизма в требуемом разведении. На 5 мин. поместить пробирку на водяную баню, затем добавить 0,5 мл перекиси водорода и ровно через 2 мин. (по секундомеру) - 3 мл 20% серной кислоты.

Колориметрирование производится при красном светофильтре (610 нм) против контрольной пробы, для приготовления которой берутся все те же ингредиенты, но вместо перекиси водорода добавляется 0,5 мл воды.

Расчет каталазно-пероксидазной активности ведется по формуле

,

где (Е_k- Е_o) - разность экстинкций контрольной и опытной пробы;

d-толщина кюветы;

Е_n-конечный объем в мл;

А_n- исходный объем в мл;

е - молекулярная экстинкция индигокармина;

t- время реакции;

С_m-концентрация микроорганизмов (микробных тел в объеме пробы).