ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Метод относится к области ветеринарной диагностики и может быть использован для экспресс-определения каталазной и пероксидазной активности различных тканей организма подопытных животных, а также многих бактериальных суспензий. Применение этого метода позволяет при моделировании антимикробной терапии осуществить правильный выбор дозы лекарственного препарата, если действие его основано на ускорении перекисного окисления липидов в микроорганизмах. Преимущество данного метода -- применение в качестве реактивов обычных, общедоступных фотопрепаратов .

Принцип метода основан на том факте, что многие каталитические процессы с участием оксидоредуктаз могут значительно изменять концентрации веществ, способных взаимодействовать с галогенидами серебра эмульсионного слоя фотоматериала - например, гидрохинона, катехина, резорцина, фенола, фенидона. Эти же вещества входят в состав различных фотопроявляющих растворов. В предлагаемом нами методе используется сопряжение процесса взаимодействия гидрохинона, восстанавливающего галогенид серебра, с процессом окисления гидрохинона перекисью водорода в присутствии пероксидазы. Наилучшие результаты при 0,01 М растворе гидрохинона дает 0,001 М раствор перекиси водорода при рН = 5,5-6,2 (при меньшей же концентрации перекиси водорода может наблюдаться конкурентная реакция окисления гидрохинона кислородом воздуха).

В качестве антиокислителя может быть добавлен сульфит натрия - тогда рабочий раствор в точности соответствует фенидон-гидрохиноновому проявителю для пленок.

Определение пероксидазы по нашему методу: в лунки иммунологического планшета микродозатором вносят по 100 мкл проявителя, разбавленного водой 1:5, затем 50 мкл исследуемого раствора и 100 мкл 0,001 М раствора перекиси водорода. Через 30 минут по 20 мкл раствора из каждой лунки микродозатором наносят на поверхность засвеченного фотоматериала (фотобумаги), затем ополаскивают водо-проводной водой и закрепляют обычным фотоспособом в тиосульфате (либо в стандартном тиосульфатном нейтральном фотофиксаже).

Для построения градуировочной шкалы так же обрабатываются растворы, имеющие из­вестную концентрацию пероксидазы хрена. Интенсивность потемнения капель сравнивается с эталоном визуально, либо с помощью микрофотометра. Таким образом, может быть определено от 0,6-1,0 нг/мл пероксидазы.

Таким методом может быть определена каталазно-пероксидазная активность сыворотки крови, гомогенатов различных органов и тканей подопытных животных, а также различ­ных бактериальных суспензий.