ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Ферментa-маннозидаза (К.Ф. 3.2.1.24) - гидролитически отщепляет концевые нередуцирующие остаткиa,d-маннозы вa-маннозидах.

Принцип способа основан на определении освобожденного из образца 4-нитрофенил-a,d-маннопиранозида красителя 4-нитрофенола, количество которого пря-мо пропорционально активностиa-маннозидазы.

Реактивы:

1. Глициновый буфер, раствор 0,2 моль/л, рН 10,5.

2. Цитратный буфер, 0,2 моль/л, рН 4,9.

3. Субстрат 4-нитрофенил-a,d-маннопиранозид, раствор 20 ммоль/л.

4. Раствор сравнения - 4-нитрофенол, 6 ммоль/л.

Ход определения.

В опытные пробы к 0,05 мл исследуемой сыворотки крови добавляют 0,1 мл 0,2 моль/л цитратного буфера, рН 4,9 и 0,05 мл 20 ммоль/л субстрата 4-нитрофенил-a,d-маннопиранозида. В контрольные пробы к 0,15 мл цитратного буфера, рН 4,9, добавляют 0,05 мл субстрата 4-нитрофенил-a,d-маннопиранозида. После инкубации в течение 90 мин в термостате при температуре 37 ^оС добавляют 3,0 мл 0,2 моль/л глицинового буфера, рН 10,5, в контрольные и опытные пробы. Через 10 мин измеряют оптические плотности проб на спектрофотометре СФ-46 в кюветах с длиной оптического слоя 10 мм при длине волны 410 нм против дистиллированной воды для суждения о количестве освободившегося при гидролизе 4-нитрофенола.

Расчет активностиa-маннозидазы в сыворотке крови (биологической жидкости) проводят по формуле

А=

где: А - активностьa-маннозидазы биологической жидкости, нмоль/мин.мл;

Ео - оптическая плотность опытной пробы;

Ек - оптическая плотность контрольной пробы;

1000 - перевод с ммоль на нмоль;

90 - время инкубации, мин;

0,05 - объем исследуемой жидкости, мл.

Основные патологические состояния, при которых отмечается повышение сывороточнойa-маннозидазы - это заболевания печени, особенно злокачественные опухоли. Поэтому предложенный способ определения активностиa-маннозидазы позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний печени.