ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Микросомальный фермент гамма-глутамилтрансфераза (известный также как гамма-глутамилтранспептидаза) (К.Ф. 2.3.2.1) катализирует реакцию переноса гамма-глутамиловой группы с гамма-глутамил-4-анилида на акцепторный дипептид глицил-глицин.

Принцип способа. Перенос гамма-глутамила с гамма-глутамил-4-анилида приводит к высвобождению 4-нитроанилина, количество которого измеряют по цветной реакции.

Реактивы: 1. Глицилглициновый буфер, раствор 0,55 моль/л, рН 8,2.

2. Гамма-глутамил-4-нитроанилид, раствор 7,5 ммоль/л, рН 8.2.

3. Уксусная кислота, раствор 10%.

4. Стандарт 4-нитроанилина, раствор 6 ммоль/л.

Ход определения

В контрольную и опытную пробирку вносят по 0,25 мл раствора субстрата (гамма-глутамил-4-нитроанилид, рН 8,2) и помещают на 5 мин. в термостат при 37 ^оС. В опытную пробирку добавляют 0,025 мл исследуемой сыворотки крови или другой биологической жидкости, содержимое тщательно перемешивают и инкубируют точно 15 мин. при вышеуказанной температуре в термостате. Затем в обе пробирки добавляют 1,5 мл 10%-го раствора уксусной кислоты, а в контрольную пробирку еще и 0,025 мл исследуемой биологической жидкости. После тщательного перемешивания с помощью стеклянной палочки измеряют оптическую плотность опытной пробы против контрольной при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на спектрофотометре СФ-46. Для определения активности гамма-глутамилтрансферазы по найденной оптической плотности используют калибровочный график, который отражает зависимость оптической плотности пробы от активности фермента.

Активность гамма-глутамилтрансферазы в биологических жидкостях выражают в международных единицах активности (Ед/л), обозначающих количество микромолей 4-нитроанилина, освобожденного из субстрата под действием одного литра сыворотки крови за 1 мин при 37 ^оС в данных условиях.

Определение активности этого фермента может быть полезным при диагностике заболеваний печени и гепатобилиарного тракта, поэтому предлагаемый способ позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний у животных, что в конечном итоге имеет значение для сохранения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.