ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Ферментb-глюкуронидаза (К.Ф. 3.2.1.31) гидролитически отщепляет глюкуронат вb-глюкуронидах.

Принцип способа основан на определении освобожденного из образца 4-нитрофенил-b,d-глюкуронида красителя 4-нитрофенола, количество которого прямо пропорционально активностиb-глюкуронидазы.

Реактивы: 1. Глициновый буфер, раствор 0,2 моль/л, рН 10,5.

2. Цитратный буфер, раствор 0,2 моль/л, рН 5,0.

3. Субстрат 4-нитрофенил-b,d-глюкуронид, раствор 20 ммоль/л,

4. Раствор сравнения, 4-нитрофенол, 6 ммоль/л.

Ход определения.

В опытные пробы к 0,05 мл биологической жидкости (сыворотки крови, слезы, ротовой жидкости, амниотической жидкости) добавляют 0,1 мл цитратного буфера, рН 5,6 и 0,05 мл субстрата 4-нитрофенил-b,d-глюкуронида. В контрольные пробы к 0,15 мл цитратного буфера, рН 5,6, добавляют 0,05 мл субстрата 4-нитрофенил-b,d-глюкуронида. После инкубации в течение 150 мин в термостате при температуре 37 ^оС добавляют по 3,0 мл 0,2 моль/л глицинового буфера, рН 10,5, в контрольные и опытные пробы. Через 10 мин измеряют оптические плотности проб на спектрофотометре СФ-46 в кюветах с длиной оптического слоя 10 мм при длине волны 410 нм против дистиллированной воды для суждения о количестве освободившегося при гидролизе 4-нитрофенола.

Расчет активностиb-глюкуронидазы в биологической жидкости проводят по формуле

А =

где А - активностьb-глюкуронидазы исследуемой биологической жидкости,

нмоль/мин, мл;

Е _о - оптическая плотность опытной пробы;

Е _к - оптическая плотность контрольной пробы;

1000 - перевод с ммоль на нмоль;

150 - время инкубации, мин;

0,05 - объем исследуемой биологической жидкости, мл.

Основные патологические состояния, при которых отмечается повышение сывороточнойb-глюкуронидазы, - это заболевания печени, особенно злокачественные опухоли. Поэтому предложенный способ определения активностиb-глюкуронидазы позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний печени.