ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Принцип метода основан на способности конкурировать с нитросиним тетразолием (НСТ) за супероксидные анионы, образующиеся в результате аэробного взаимодействия восстановленной формы НАДН и феназинметасульфата (ФМС). В результате этой реакции НСТ восстанавливается с образованием гидразинтетразолия. В присутствии СОД процент восстановления НСТ уменьшается.

Приборы: спектрофотометр, термостат, центрифуга.

Реактивы:

1. Фосфатный буфер, 0,15 М, рН 7,8.

2. ТРИС-ЭДТА буфер, рН 8,0.

3. Реагент 1. 62 мг ЭДТА, 500 мг НСТ, 92 мг феназинметасульфата растворяют в 1000 мл фосфатного буфера, рН 7,8.

4. Реагент 11. 76,3 мг НАДН растворяют в 100 мл ТРИС-ЭДТА буфера, рН 8,0.

Проведение анализа.

В две пробирки вносят следующие реагенты:

Реакцию проводят при температуре 25 ⁰С. Измерение ведут в кювете с длиной оптического пути 1 см на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 540 нм. После перемешивания компонентов пробы в кювете устанавливают начальную экстинкцию. Через 10 мин измеряют нарастание оптической плотности раствора.

Расчет ведут по формуле

блокирования,

где Ео - экстинкция реакционной смеси в отсутствии СОД (нулевой пробы)

в состоянии равновесия,

Епр - экстинкция исследуемой пробы в состоянии равновесия.

За единицу активности принимают 50% торможения реакции восстановления НСТ, активность фермента выражают в усл.ед. на 1 г белка.

Повышение активности супероксиддисмутазы в плазме крови отмечается при заболеваниях печени, почек, сахарном диабете.

Метод позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний у животных.