ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

На кафедре медицинской химии Кировского государственного медицинского института разработан метод определения холестерина мембран эритроцитов, который позволяет судить о состоянии мембран внутренних органов.

Принцип метода основан на осаждении из цельной крови при помощи этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) эритроцитов и выделении центрифугированием эритроцитарной массы. В последней содержание холестерина определяют любым изизвестных методов.

Приборы: фотоэлектроколориметр, центрифуга, термостат.

Реактивы:

1. Натрия этилендиаминтетраацетат (ЭДТА), раствор 1 мг/мл.

2.Физиологический раствор, 0,85%-й натрия хлорид.

3. Изопропиловый спирт.

4. Цветной реактив для определения холестерина. Для его приготовления заготовляют 0,1%-й раствор хлорного железа в ледяной уксусной кислоте. Три части полученного раствора смешивают с двумя частями концентрированной серной кислоты (х.ч.) и охлаждают до комнатной температуры.

5. Стандартный раствор холестерина. 100 мг чистого холестерина растворяют в небольшом количестве ледяной уксусной кислоты, охлаждают и доводят объем до 50 мл.

Ход определения

Берут цельную кровь, в качестве консерванта используют ЭДТА натрия (1 мг/мл). После центрифугирования при 2000 об/мин в течение 5 - 8 мин и разделения полученную эритроцитарную массу трижды отмывают двукратным объемом физиологического раствора и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 7 - 8 мин. Затем эри- троцитарную массу разводят физиологическим раствором в 2 раза. Для последующего анализа берут 1 мл эритроцитарной взвези, приливают 3 мл изопропилового спирта, встряхивают в течение 15 мин и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. К 0,1 мл элюата прибавляют 2 мл цветного реактива, содержимое хорошо перемешивают и оставляют в термостате при температуре +60 ^оС в течение 15 мин, затем пробирки охлаждают до комнатной температуры и определяют на фотоэлектроколориметре экстинкцию в кюветах с рабочей длиной 5 мм при длине волны 560 нм против цветного реактива. Расчет проводят по калибровочной кривой с раствором, содержащим 1 - 2 ммоль/л холестерина.

Повышение содержания холестерина мембран эритроцитов может свидетельствовать о патологии мембран внутренних органов печени, почек, легких и др. Поэтому определение холестерина мембран эритроцитов в конечном итоге направлено на сохранение здоровья и поголовья высокопродуктивных животных.