ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Альфа-интерферон (альфа-ИФН) представляет собой семейство белков с моле-кулярной массой около 20 КД и является одним из элементов неспецифической защиты организма от вирусных инфекций. При вирусных инфекциях уровень его существенно повышается и достигает десятков сотен, а при некоторых инфекциях и тысяч единиц на 1 мл сыворотки. В норме альфа-ИФН или отсутствует, или количество его незначительно и составляет от 5 до 50 пкг/мл. Уровень альфа-ИФН имеет большое диагно-стическое и прогностическое значение. По количественному содержанию альфа-ИФН в сыворотке и плазме крови можно судить о характере протекания инфекционного процесса, выявить его острую стадию.

В связи с широким распространением в ветеринарии препаратов интерферона (миксоферон, кинорон, ветом, ветосубалин) и его индукторов (ридостин, камедон, циклоферон) существенный интерес представляет осуществление контроля за уровнем альфа-ИФН в сыворотке крови животных, что позволяет оптимизировать схемы применения препаратов интерферонов и интерфероногенов.

Была испытана интерфероногенная активность препарата лигавирин на сви-ньях и коровах. Ранее было установлено, что лигавирин является супериндуктором эндогенного интерферона с ранним пиком его продукции при титровании его в культу-ре клеток по задержке цитопатогенного действия тест-вируса.

Мы использовали для количественного определения альфа-ИФН твердофазный иммуноферментный метод с применением пероксидазы хрена в качестве индикатор-ного фермента. Один тип моноклональных антител иммобилизован на внутренней поверхности ячеек планшетов для микротитрования. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитону молекулы альфа-ИФН находится в виде конъюгата с биотином. Индикаторным компонентом является конъюгат пероксидазы хрена со стрептавидином, имеющим очень высокое сродство к биотину. Предлагаемый метод позволяет производить одновременное внесение в ячейки микропланшета определяемого образца и коньюгата антител с биотином. После инкубации и промывки в ячейки вносят конъюгат пероксидазы со стрептавидином, вновь инкубируют, промывают, вносят субстрат и измеряют активность связанной пероксидазы с использованием автоматического фотометра для микропланшетов при длине волны 450 нм. Строят калибровочную кривую и определяют концентрацию альфа-ИФН по показателям оптической плотности.

Содержание альфа-интерферона в сыворотке крови свиней и коров

после введения лигавирина, пкг/мл

Было установлено, что до введения лигавирина альфа-ИФН в крови животных не выявлялся (см. таблицу). Наивысший пик продукции альфа-ИФН наблюдался в крови через 6 ч после введения индуктора, через 12 - 18 - 24 ч уровень альфа-ИФН посте-пенно снижался и через двое суток в крови не регистрировался.

Эти данные следует учитывать при разработке схем применения лигавирина при его курсовом назначении.