ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Изучены основные показатели интерферонового (ИФН) статуса крупного рогатого скота в норме, при различных физиологических состояниях и при некоторых видах патологии, определена информативная ценность полученных результатов.

Наиболее простым и доступным суммарным показателем служит количественное определение интерферона в сыворотке крови (сывороточный или циркулирующий интерферон). Другим показателем ИФН-статуса служит определение уровня продукции ИФН-альфа и ИФН-гамма лейкоцитами, индуцированными ин витро.

Для титрования бычьего интерферона использовали перевиваемые линии клеток ЛЭК (культура клеток легких эмбрионов коровы) и МДВК (культура клеток почек теленка). Тест-вирусом служил вирус везикулярного стоматита штамм "Индиана". В качестве ИФ-индукторов использовали вирус болезни Ньюкасла штамм "Канзас" и фитогемаглютинин "Дифко" (ФГА).

Для определения сывороточного интерферона кровь (1-1,5 мл) брали из вены, добавляли гепарин (10 ед/мл) и центрифугировали при 800 - 1000 об/мин. Для индукции синтеза интерферона лейкоцитами пробы цельной крови (100 мкл), содержащие гепарин, вносили в центрифужные пробирки со средой Игла (по 800 мкл) и индуктором ИФН (100 мкл). Оптимальное количество ИФН-индуктора - 1 ЦПЕ/мл, ФГА - 5 мкг/мл. Индукцию проводили в течение 24 ч при 37 ^оС в атмосфере с содержанием 5%-й углекислоты. После инкубации кровь центрифугировали 10 мин при 1000 об/мин.

Титр интерферона определяли микрометодом на 96-луночных панелях на 1 - 2-дневном монослое клеток ЛЭК или МДВК. Каждую реакцию ставили в объеме 200 мкл. За титр ИФН принимали его последнее разведение, тормозящее на 50% развитие цитопатогенного действия 100 ТЦД тест-вируса.

Определение ИФН-статуса в цельной крови имеет ряд несомненных преимуществ. Оно может быть выполнено в малом объеме венозной или капиллярной крови. Техника постановки реакции ИФН-статуса быстро выполнима, не требует выделения лейкоцитов и многократного центрифугирования. В пробах цельной крови индукция ИФН ин витро максимально приближена к условиям ин виво, и осуществляется в присутствии аутологичной сыворотки цельной крови, где сохраняется соотношение всех клеточных и гуморальных компонентов.

При обследовании коров черно-пестрой породы Госучхоза ВГСХА установлено, что в подавляющем большинстве случаев (около 90%) титры циркулирующего интерферона не превышали фоновых 2 - 4 МЕ/мл, т.е. находились в пределах физиологической концентрации. У этих животных в 80% случаях наблюдали высокий уровень продукции ИФН-альфа и ИФН-гамма лейкоцитами крови (640 МЕ/мл) и средний уровень 32 - 64 МЕ/мл. Таким образом, ИФН-статус коров характеризовался низкими концентрациями ИФН в сыворотке крови и выраженной способностью лейкоцитов продуцировать этот полипептид в ответ на адекватную индукцию.

Вместе с тем обращает на себя внимание индивидуальное различие организма животных по данным показателям у телят. Так у 20% обследованных коров отмечена сниженная способность лейкоцитов продуцировать ИФН-альфа и ИФН-гамма (меньше 8 МЕ/мл). Полученные денные указывают на врожденную или приобретенную недостаточность (дефектность) системы ИФН.