ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Гемофилезная плевропневмония свиней (ГППС) -инфекционная контагиозная болезнь, характеризующаяся при остромтечении геморрагическим воспалением лег-ких и фибринозным плевритом, а при подостром и хроническом - развитием очаговой гнойной некротизирующей плевропневмонией и фибринозным плевритом. Возбуди-телем этой болезни являются гемофильные бактерии haemо philus plevropnevmoniae. Некоторые ветеринарные лаборатории незанимаются диагностикой ГППС из-за особенностей культивирования возбудителя, усложняющих проведение лабораторных исследований. Отсутствуют и эффективные средства профилактики и терапии данного заболевания.

По просьбе ветеринарных специалистов АОЗТ "Заречье", г.Киров, были прове-дены бактериологические исследования патологического материала от свиней на ГППС. На убойном пункте свинокомплекса были взяты кусочки пораженных легких, средостенные и бронхиальные лимфоузлы от четырех вынужденно убитых поросят в возрасте 4 - 6 месяцев. Патологический материал был доставлен в лабораторию кафедры эпизоотологии и микробиологии ВГСХА в термосе со льдом.

Бактериологическую диагностику на ГППС проводили по схеме (см.рисунок). В первый день исследований делали посев на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя и проводили микроскопию мазков-отпечатков из патоло-гического материала. Поверхность кусочков легких и лимфоузлов прижигали шпателем, набирали пульпу в пастеровскую пипетку, вносили ее в пробирку с 1-2 см^змясо-пептонного бульона (МПБ), тщательно перемешивали и засевали в МПБ, на мясо-пептонный агар (МПА) в пробирке, на МПА и кровяной агар (МПА с добавлением 10% дефибринированной крови лошади) в бактериологических чашках. Чашки с посевами помещали на 30 - 40 мин.при температуре37 -38^оС для подсушивания, после чего бактериологической петлей по всему диаметру чашки засевали на агар сплошным штрихом культуру сапрофитного стафилококка (бактерии-кормилки). Пробирки и чашки с посевами помещали в термостат и культивировали 18 - 24 ч при температуре 37 - 38^оС.

Для микроскопического исследования кусочки легкого и лимфоузла погружали в спирт (этанол) и обжигали над пламенем спиртовки. Стерильными ножницами вырезали кусочки паренхимы и делали мазки-отпечатки. После высушивания и фиксации препа-ратов окрашивали по Граму и на капсулы по Михину. При микроскопии окрашенных препаратов из патологического материала обнаружили очень мелкие грамотрица-тельные коккобактерии, расположенные одиночно и парами, с капсулами.

На второй день просматривали пробирки и чашки с посевами и изучали культу-ральные свойства выделенной культуры. Отмечалирост мелких, круглых, гладких колоний слизистой консистенции на МПА и кровяном агаре вблизи штриха бактерии-кормилки. На МПА с кровью колонии окружены прозрачной зоной бета-гемолиза. В мазках из колоний обнаружили грамотрицательные бактерии, окруженные капсулой и расположенные одиночно и парами, иногда короткими цепочками. На питательных средах без бактерии-кормилки роста гемофильных микроорганизмов не установлено.

Далее проводили отвивку описанных колоний на шоколадный агар, на МПБ, МПА и на МПА с баккормилкой. После 24-часового инкубирования был отмечен интен-сивный рост на шоколадном агаре колоний типичных для гемофильных бактерий и около штриха бактерии-кормилки (сателлитный рост) на МПА. На МПБ и МПА без фактора роста колоний не обнаружили.

Для идентификации выделенной культуры делалипересев с шоколадного агара на среду Заксе для определения уреазной активности. Положительная проба на уреазу была получена у двух выделенных культур бактерий.

Для определения патогенных свойств выделенной культуры ставили биопробу на двух белых мышах живой массой 18 г. С этой целью культуру, выращенную на шоко-ладном агаре, смывали физиологическим раствором хлорида натрия и в дозе 0,5 мл вводили внутрибрюшинно двум белым мышам. Зараженные мыши пали через 72 ч после заражения.

Таким образом, из патологического материала были выделены мелкие грам-отрицательные микроорганизмы, которые для роста на питательных средах нуждаются в ростовых факторах, формирующие капсулу, способные продуцировать уреазу и патогенные для белых мышей. Это дает возможность считать, что выделенная культура является Н.рlevropnevmoniae.

Предложенная схема лабораторной диагностики гемофилезной плевропневмо-нии свиней может быть использована в работе ветеринарных лабораторий.

Схема лабораторной диагностики

гемофилезной плевропневмонии свиней