ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Метод основан на выделении фукогликопротеинов из сыворотки крови осаждением их этанолом и центрифугированием. Фотометрия хромогена, образованного последовательным воздействием на метилпентозы в составе фукогликопротеинов серной кислотой и гидрохлоридом цистеина при кипячении, позволяет судить о количестве фукозосодержащих белков.

Приборы: спектрофотометр, фотоэлектроколориметр КФК-З, центрифуга, водя-ная баня.

Реактивы: цистеина гидрохлорид, раствор З%; сернокислый реактив (6 объемов концентрированной серной кислоты и 1 объем дистиллированной воды); натрия гидрооксид, раствор 0,1 н; этанол, 95%; стандартный раствор фукозы или рамнозы, содержа-

щий 20 мкг в 1 мл дистиллированной воды.

Ход определения

В 2 центрифужные пробирки вносят по 0,1 мл исследуемой сыворотки крови, добавляют 5 мл 95%-го этанола. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и через 5 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. После осторожного удаления надосадочной жидкости, осадок растворяют в 5 мл 95%-го этанола, встряхивают в течение 5 мин и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют. Дальше пробирки помещают в воду со льдом, осадок растворяют в 1 мл натрия гидроксида и добавляют по 4,5 мл сернокислого реактива, охлажденного до 0 ^оС. Такое же количество сернокислого реактива добавляют к холостой (1 мл дистиллированной воды) и к стандартной (1 мл) пробам. Смеси осторожно перемешивают, не вынимая их из воды со льдом. Все пробирки с содержимым опускают в кипящую водяную баню на 3 мин (с момента закипания), охлаждают проточной водой и добавляют по 0,1 мл цистеинового реактива (кроме холостых проб) и оставляют смеси на 60-90 мин при комнатной температуре. Оптическую плотность опытной и стандартной проб измеряют на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре КФК-3 при 396 и 430 нм против соответствующих холостых проб. Затем находят разность величин экстинкции Е = Е ₃₉₆ - Е ₄₃₀ отдельно для опытной и стандартной проб.

По калибровочной кривой, построенной с использованием разности величин экстинкций стандартных растворов, находят содержание фукозы и ее концентрации выражают в миллиграммах на 1 дл исследуемой биологической жидкости.

Измерение количества фукогликопротеинов имеет значение для диагностики заболеваний, сопровождающихся распадом острофазных белков иммунных комплексов и разрушением клеточных элементов, поэтому предлагаемый способ позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний у животных, что, в конечном итоге, имеет значение для сохранения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.