ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

В настоящее время одной из важнейших задач является внедрение в вете-ринарную практику простых нетрудоемких и доступных методов иммунологического обследования животных.

Комплекс тестов для оценки иммунного статуса микрометодом имеет ряд преимуществ, а именно: для первичного иммунологического обследования требуется всего 0,06 млкапиллярной крови.Кровь, взятая без антикоагулянта, может транспор-тироваться на большие расстояния. На постановку тестов розеткообразования и фагоцитоза требуется всего 20 - 25%полученной лейковзвеси. Остающаяся(75 - 80%)лейковзвесь представляет собой резерв, за счет которого можно расширить набор тестов без увеличения объема капиллярной крови при заборе.

Использование однократного центрифугирования вместо многократного не только ускоряет исследования, но и обеспечивает более щадящий режим выделения клеток. Избранные тесты позволяют проводить массовые обследования животных. Для базового же комплекса методов требуется не менее 4-5 мл крови , которые можно получитьлишь из вены.

Комплекснаяоценка иммунного статуса животных сиспользованием микроме-тодов была апробирована на шестиклинически здоровых свиньях в возрасте9месяцев.

Капиллярную кровь забирали из подготовленного уха после прокола кожи стерильным скарификатором припомощи автоматической пипеткив количестве 0,05 мл и быстро переносилив пластиковую пробирку, содержащую 0,55 мл физиологического раствора. Параллельно у этих же животных из ушнойвены забиралипо 5млвенознойкрови для проведения исследований базовым методом с целью последующего срав-нения.

Микрометод спонтанного розеткообразования. Реакции розеткообразования и фагоцитозаставили в 60-луночных микрокамерахдля иммунологических реакций одноразового использования,имеющих лунки объемом0,02млс плоскимдном. Лейко-циты в концентрации 1Ч10 ⁶мл вносили по 0,005 мл в каждую лунку камеры. К клеткам добавляли по 0,005 мл 0,001%-й взвеси эритроцитов барана (ЭБ)из расчета100ЭБ на 1 лейкоцит. Камеры центрифугировали 5 мин. при100 об/мин. и инкубировали в течение 30 мин. при +4^оС. Розетки фиксировали добавлением 0,005мл6%-го раст- вора глутарового альдегида на 3 - 5мин. Клетки отмывалиот глутарового альдегидаи избыткаЭБ, для чего в лункивносили по0,02 мл физиологического раствора и, спустя15мин., всю лишнюю жидкость вместе с избытком ЭБ удаляли с помощью фильтровальной бумаги. Камеры высушивали, клетки окрашивали по Лейшману и микроскопировали со стороны дна камеры в 200 - 300 раз. Подсчитывали относитель-ное и абсолютное содержание Е-РОК(Т-лимфоцитов).

Для микрометода определенияВ-лимфоцитов (ЕАС-РОК)лейкоциты в концент-рации 1Ч10 ⁶мл вносили в лунки камеры по 0,006 мл, к ним прибавляли 0,005 мл комплекса ЕАС₃, приготовленного пообщепринятой схеме. Дальнейшее проведение методики аналогично микрометоду спонтанного розеткообразования (Е-РОК).

Микрометод выявления Е-розеткообразованияпослеинкубацииклетокстеофиллином. Теофиллин - резистентные Е-РОК - субпопуляции клеток, обладающих хелпернойактивностью.

Использовали микрокамеры с заранее высушенным теофиллином. В лунку микрокамерывносили 0,005 мл полученной суспензии клеток. Инкубировали при 37 ^оС 60 мин. Далее приливали 0,006 мл 0,001%-й суспензииЭБиставили реакцию Е-РОК.

В результате исследования было установлено, что средниезначения рядаиммунологических показателей в капиллярной и венозной крови хотя и различались, но этиразличия не были достоверными.

Комплекс тестов первичного иммунного обследования дает возможность при небольших затратах труда и материалов обнаружить нарушения в Т- и В-системах, а также в фагоцитарном звене клеточного иммунитета животных.

Предлагаемыеметодыимеют ряд чисто технических преимуществ:сокращение времени исследования на 40 - 50 мин., использование одноразовой стандартной посуды отечественного производства и микрообъемов клеток и реактивов.

Комплекс микрометодов первичногоиммунологическогообследования позво-ляет сократить необходимый объем крови в 100 раз, что дает возможность исполь-зовать для массовых анализов капиллярную кровь.