ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

«Результат выполнения научно-исследовательской работы».

Геном лошадей весьма слабо изучен, построена лишь приблизительная генетическая карта. Все это свидетельствует об актуальности изучения генотипа различных пород лошадей с использованием методов молекулярной генетики.

rapd-pcr-технология была выбрана в качестве метода исследования межпородных и внутрипородных различий, так как ее использование не требует предварительного анализа исследуемого генома (картинирования и секвинирования). Целью настоящей работы, в первую очередь, ставилась оценка возможности использования методов геномной дактилоскопии, основанных наrapd-pcr-технологии, для выявления молекулярно-генетического полиморфизма, как у различных пород лошадей, так и различных популяций башкирской породы лошадей, разводимых на территории республики.

Объектом исследований являлись 114 представителей башкирской породы из основных гнезд разведения породы: 16 кобыл и 4 жеребца из Уфимского конного завода №119, 36 кобыл и 8 жеребцов из КПП «Ирандыкский» Баймакского района, 49 кобыл и 1 жеребец из Баймакского опытного хозяйства Башкирского научно-исследовательского института сельского хозяйства.

rapd-pcr-амплификацию проводили по методике В.И. Глазко (1998) в следующем режиме: 5 циклов - 1 мин при 92 ^оС, 1 мин при 35 ^оС, 2,5 мин при 72 ^оС; 35 циклов - 1 мин при 92 ^оС, 1 мин при 42 ^оС, 2,5 мин при 72 ^оС. Всего 40 циклов.

Смесь дляpcrсодержала по 1 мкл препарата ДНК (20-25 нг), по 1 мкл каждого праймера (ubc-85: 5'-gtgctcgtgc-3';ubc-126: 5'-ctttcgtgct-3'), 2,5 мкл 10х буфера для амплификации, 18,5 мклbidistilat, 1 мкл суммарногоdntp(по 250 мкмольdgtp,datp,dttp,dctp) и 1 мклtaq-полимеразы (2,5 ед.) под слоем вазелинового масла.pcrпроводили в объеме 25 мкл в амплификаторе ТП4-ПЦР-01 - «Терцик» (Россия).

Продукты амплификации идентифицировались методом электрофореза в 1,5%-ном агарозном геле, с окраской бромистым этидием, в ультрафиолетовом свете (vieira,messing, 1987).

В качестве маркера молекулярных масс использовали продукт рестрикции ДНК фага лямбда рестриктазойpsti. Рестрикцию проводили в течение 16 часов при температуре 37 ^оС (И.Ю. Долматова, 2000).

Результаты проведенных исследований показали, что влияние заводских пород на башкирскую породу лошадей в наименьшей степени сказалось на популяции из Баймакского опытного хозяйства. Индексы генетического сходства (nei,li, 1979) между русской рысистой породой и башкирской породой из Баймакского опытного хозяйства, как при применении в качестве праймераubc-85, так и праймераubc-126, показали наибольшее различие, нежели башкирская порода из Уфимского конного завода №119 или НП «Ирандыкский» с русской рысистой. Для восстановления типа башкирской лошади рекомендуем использовать жеребцов-производителей в первую очередь из Баймакского опытного хозяйства.

Таким образом, использованная геномная дактилоскопия лошадей посредствомrapd-pcr-технологии позволяет достаточно точно идентифицировать виды и породы и в сочетании с классическими методами (морфологическими, анатомическими, физиологическими и др.) может стать основополагающим методом в определении породной принадлежности тех или иных популяций лошадей. Выявление в ходе таких экспериментов породоспецифические генетические маркеры могут эффективно использоваться в селекции лошадей.

С помощьюrapd-pcr-технологии можно проводить генетическую паспортизацию племенных хозяйств с созданием генетического паспорта каждой породы и составлением соответствующих генетических каталогов. Это поможет навести порядок в племенной работе, избежать неконтролируемой метизации и сохранить чистоту пород лошадей - исходного материала для генетико-популяционных и филогенетических исследованиях лошадей, а также в экологическом мониторинге окружающей среды.