ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения НИР.

Согласно предлагаемому способу в качестве объекта иммунизации используют лошадь, которой подкожно в места расположения поверхностных шейных лимфатических узлов и лимфоузлов коленной складки с обеих сторон в 2 цикла с интервалом в 30 дней между циклами вводят гистоглобулин. Забор крови осуществляют не менее двух раз:первый забор - через7 суток после реиммунизации, последующие - не ранее, чем через 48 ч после первого забора.

В процессе проведения исследований для иммунизации были взяты две лошади - 3 и 5 лет, средней упитанности, практически здоровые. Подкожную иммунизацию гистоглобулином в места расположения крупных лимфатических узлов осуществляли в 2 цикла. 1-й цикл:животным вводили подкожно в области поверхностных шейных лимфатических узлов и лимфоузлов коленной складки с двух сторон гистоглобулин с неполным адъювантом Фрейнда по 5,0 мл. Через 7 дней была сделана повторная инъекция гистоглобулина (10 мл) с неполным адъювантом Фрейнда (10 мл) подкожно в те же точки. 2-й цикл:через 30 дней после 1-го цикла проведена реиммунизация гистоглобулином с неполным адъювантом Фрейнда по 10 мл, а через каждые 4-5 дней - еще 5 инъекций по 20, 40, 80, 100, 120 мл подкожно в те же точки.

Через 7 дней после реиммунизации проведен забор крови в количестве 8-9 л, а через 48 часов после первого забора крови - второй забор в количестве 7-8 л. Третий забор крови в количестве 8-9 л сделан через 7 дней после 2-го забора крови, а четвертый забор (9 л) - через 30 дней после третьего забора.

Из забранной крови отделяли целе­вой продукт, в котором определяли титр антител против гистамина методом непрямой гемагглютинации по Бойдену, основанном на способности предварительно обработанных танином эритроцитов адсорбировать на себе белок. Сенсибилизированные гистоглобулином эритроциты дают агглютинацию в присутствии антител к гистоглобулину. Эритроциты барана готовили зара­нее с помощью консервации формалином. В день постановки метода обрабатывали эритроциты танином и сенсибилизирова­ли их гистоглобулином.

Реакцию ставили на полистироловых пластинках. Из испытуемой сыворотки готовили 4 одинаковых ряда двухкрат­ных разведений в 1 мл, начиная с 1:2 и т.д. В каждый ряд вносили соответственно по 0,1 мл контрольных эритроцитов, нагруженных гистоглобулином. Инкубировали в термостате при 37 ⁰С в течение 2 часов, после чего проводили учет реакции, наблюдали нарастание титра антител. Результаты наблюдения представлены в таблице.

Нарастание титра антител

Полученные результаты свидетельст­вуют, что уже при втором заборе крови титр антител к гистамину в полу­чаемой сыворотке выше, чем в прототи­пе (1:64 - по методу Ухтерлони, 1:1б0 - по иммуногистохимическому мето­ду). И в дальнейшем наблюдается на­растание титра антител против гистамина в получаемой сыворотке. Титр полученной сыворотки свидетельствует огипериммунности конечного продукта. При этом способ технически достаточ­но прост за счет осуществления иммуни­зации в 2 цикла в места расположения поверхностных шейных лимфоузлов и лим­фоузлов коленной складки с обеих сто­рон, а также благодаря использованию готового препарата - гистоглобулина. Кроме того, использование лошади в ка­честве объекта иммунизации позволило увеличить выход готового продукта до 3,0-3,5 л сыворотки (против 12,0-12,5мл в прототипе), причем животное может быть использовано многократно без повторной иммунизации.