ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения НИР.

Согласно предлагаемому способу получения иммунной сыворотки против гистамина и серотонина осуществляют подкожную иммунизацию лошади гистосероглобином в места расположения крупных лимфатических узлов в два цикла.

1цикл:животному вводят подкожно в области поверхностных шейных лимфатических узлов и узлов коленной складки с двух сторон гистосероглобин с полным адъювантом Фрейнда по 5 мл. Через 7 дней проводят повторную инъекцию гистосероглобина (10 мл) с полным адъювантом Фрейнда (10 мл) подкожно в те же точки.

2цикл: через 14 дней (после 1-го цикла) проводят реиммунизацию гистосероглобином с полным адъювантом по 10 мл и далее через каждые 4-5 дней по 20, 40 и 80 мл подкожно в те же точки.

1-й забор крови проводится через 14 дней после реиммунизации (8-9 л крови), 2-й забор- через 48ч после первого забора (7-8 л), 3-й забор - через 30 дней после реиммунизации (8-9 л).

В конечном целевом продукте определяют титр антител гистамина и серотонина (например, методом непрямой гемагглютинации).

Приведенные ниже примеры иллюстрируют осу­ществление заявляемого способа получения им­мунной сыворотки против гистамина и серотонина.

Пример 1. Лошадь 5-летнего возраста, серой масти, средней упитанности, весом 500 кг прак­тически здорова. Осуществлена иммунизация гистосероглобином в места расположения крупных лимфатических узлов в соответствии с предлагаемой схемой. Иммунизацию проводили в 2 цикла. Забор крови осуществляли трижды. В ко­нечном целевом продукте определяли титр антител против гистамина и серотонина методом непрямой гемагглютинации по Бойдену, основанным на способности предварительно обра­ботанных танином эритроцитов адсорбировать на себе белок. Сенсибилизированные гистосерогло­бином эритроциты дают агглютинациию в присутствии антител к гистосероглобину. Эритроциты барана готовят заранее с помощью консервации формалином.

В день постановки опыта готовят:

-буфер n 1 - рН 7,2 - 70 ч. 0,158 М раствора. +30 ч. 0,158 М раствора. КН ₂ РО ₄;

-буфер n 2 - рН 6,4 - 30 ч. 0,158 М раствора.na ₂НРО ₄ + 70 ч. 0,158 М раствора.

КН ₂РО ₄.

Оба буфера разводят физраствором в соот­ношении 1:1.

Обработка эритроцитов танином: к 10%-й взвеси эритроцитов добавляют половинное количество буфера n 1 и такой же объем танина (в разведении 1:20000), инкубируют в течение 30 мин при 20°С, центрифугируют, отмывают осадок оставшейся половиной буфера n 1 и разводят физраствором.

Сенсибилизация эритроцитов: гистосероглобин разводят растворителем до содержания белка 1 мг/мл, инактивируют при 56°С в течение 40 мин на водяной бане. К одному объему эритроцитов до­бавляют 4 объема буфера n 2 и один объем гистосероглобина(в контроле - 1 объем физраствора), размешивают и ставят в термостат при 37 ⁰С на 30 мин. Затем цетрифугируют, осадок отмывают дважды двойным объемом инактивированной сы­воротки морской свинки в разведении 1:200 и ею разводят полученные сенсибилизированные эрит­роциты до 2,5%-й взвеси.

Реакцию ставят на полистироловых пластинках. Из испытуемой сыворотки готовят 4 одинаковых pядa двукратных paзвeдeний в объеме 1 мл, начиная с 1:2 ит.д .В каждый вносят соответственно по 0,1 мл контрольных эритроцитов, нагруженных гистосероглобином. Инкубируют в термостате при 37°С в течение 2 ч, после чего проводят учет реакции.

Результаты наблюдения нарастания титра антител представлены в таблице 1.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что уже при втором заборе крови титр антител к гистамину и серотонину в получаемой сыворотке выше. В дальнейшем наблюдается нарастание титра антител против гистамина и серотонина в получаемой сыворотке. Титр антител в полученной сыворотке свидетельствует о гипериммунности конечного продукта.

Пример 2. Для иммунизации взяты две лошади (3 и 5 лет) средней упитанности, практически здо­ровые. Лошади проиммунизированы гистосероглобином по предлагаемой схеме:в два цикла в места расположения крупных лимфатических узлов (поверхностных шейных лимфоузлов и коленной складки с обеих сторон). Результаты наблюдений представлены в таблице 2.

Проведенные испытания подтвердилипреимущества предлагаемого способа. Сыворотка, получаемая от животных, поливалентна, т.е. содержит ан­титела против гистамина и серотонина. Использо­вание полного адъюванта Фрейнда, обладающего большей степенью стимуляции иммуногенности лошадей, позволило получить сыворотку с титром антител против гистамина и серотонина 1:4096 по методу РНПГА при сокращении сроков иммунизации в 1,7 раза.

Полученные результаты позволяют рекомендовать метод к широкому применению в ветеринарной практике для получения антисыворотки к низкомолекулярным биологическим веществам - гистамину и серо­тонину.

Характер нарастания титра антител в процессе иммунизации (по примеру 1)

Таблица 1

Характер нарастания титра антител в процессе иммунизации (по примеру 2)

Таблица 2