ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы

Антигеннезависимая дифференцировка В-лимфоцитов представляет собой процесс образования зрелых функционально полноценных В-лимфоцитов из клеток-предшественников, который протекает на территории центральных органов иммунитета. Известно, что угнетение антигеннезависимой дифференцировки В-лимфоцитов является одним из механизмов развития иммунодефицита по В-системе иммунитета. Применение в таких случаях стимуляторов антигеннезависимой дифференцировки может привести к нормализации иммунного статуса организма.

Известен ряд веществ, обладающих способностью стимулировать антигеннезависимую дифференцировку В-лимфоцитов. Впервые такое свойство было описано у экстрактов из центральных органов иммунитета - бурсы Фабрициуса птиц и костного мозга млекопитающих (бурсопоэтин, бурсилин, гемалин и др.). Эти вещества состоят из комплекса пептидов, которые способны стимулировать антигеннезависимую дифференцировку В-лимфоцитов. Использование их в качестве лекарственных средств в медицине и ветеринарии затруднено в связи со сложностью способов получения, малым выходом активных веществ, значительной вариабельностью их физико-химических свойств, а также из-за возможности возникновения у больных побочных реакций вследствие присутствия в данных препаратах балластных высокомолекулярных компонентов. Предпочтительнее использовать низкомолекулярные синтетические пептидные соединения. Они эффективны в чрезвычайно малых дозах, не оказывают аллергенного и токсического действия на организм.

Известен синтетический пептид, имеющий формулу lys-his-gly-nh ₂, способный стимулировать антигеннезависимую дифференцировку В-лимфоцитов, выпускаемый под фирменным названием "бурсин" ("sigma", Швеция). Максимальная биологическая активность данного средства проявляется в концентрации 1 мкг/мл in vitro и 1 мг/кг веса тела при парентеральном введении in vivo.

Предлагается использовать синтетический пептид структурной формулы: l-тирозил-l-глутамил-l-глицин (tyr-glu-gly) в качестве средства, стимулирующего антигеннезависимую дифференцировку В-лимфоцитов.

Трипептид формулы tyr-glu-gly был обнаружен в активной фракции экстракта ткани бурсы Фабрициуса и в дальнейшем синтезирован стандартной методикой твердофазного синтеза путем наращивания пептидной цепи с n-конца.

При экспериментальном изучении биологической активности предлагаемого средства выявлена способность стимулировать антигеннезависимую дифференцировку В-лимфоцитов, превышающую таковую в 10 раз известного аналога бурсина.

Так, в культуре лимфоцитов периферической крови больных с глубокими ожогами предлагаемое средство нормализует число лимфоцитов с маркерами cd21, cd22 и igm в концентрациях от 0,05 до 1 мкг/мл, причем максимальная активность наблюдается при концентрации пептида 0,1 мкг/мл, в то время как известное средство бурсин проявляет аналогичную активность лишь в концентрации 0,5-1 мкг/мл.

Введение трипептида tyr-glu-gly в дозах от 0,01 до 1 мг/кг веса эмбрионально бурсэктомированным цыплятам приводит к увеличению количества зрелых В-лимфоцитов, имеющих ig-рецепторы на своей поверхности, с пиком активности в дозе 0,1 мг/кг веса тела. Аналогичный эффект достигается и введением бурсина в дозах от 0,1 до 1 мг/кг веса, а максимальная активность бурсина проявляется в дозе 1 мг/кг веса тела цыпленка.

У бурсэктомированных цыплят вследствие нарушения дифференцировки В-лимфоцитов значительно угнетается гуморальный иммунный ответ, развивается лейкопения, уменьшается вес тела и лимфоидных органов. Введение предлагаемого средства приводит к индукции антигеннезависимой дифференцировки В-клеток, увеличению количества функционально полноценных В-лимфоцитов, что выражается в нормализации иммунного ответа, возрастании числа лейкоцитов периферической крови, веса тела, селезенки и тимуса.

Таким образом, предлагаемое средство может применяться в качестве иммуностимулятора при иммунодефицитных состояниях, в первую очередь с поражением В-звена иммунитета, различной этиологии (инфекционные заболевания, стрессы и т.д.), в патогенезе которых значительную роль играет дефект антигеннезависимой дифференцировки В-лимфоцитов. Средство может применяться и для профилактики указанных состояний.