ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

1. Анаплазмоз - трансмиссивная, природноочаговая инфекционная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, зебу, буйволов и филогенетически родственных им диких парнокопытных (лось, олень, косуля. сайгак, козерог и др. животных), вызываемая возбудителями порядкаrickettsiales,семейства Аnaplasmatacea,родаanaplasma.

Возбудители анаплазмоза обладают видовой специфичностью. У крупного рогатого скота и родственных ему диких животных анаплазмоз вызываютa.marginaleи

a.centrale,у овец и коз -a.ovis.Заболевание регистрируется во всех странах мира. Болеют животные анаплазмозом в любое время года.

Болезнь может протекать остро, подостро, хронически с переходом в длительное (проктически пожизненное) анаплазмозоносительство, сопровождается глубокой анемией аутоиммунной природы, лихорадкой постоянного или перемежающегося типа, рецидивами, расстройством работы сердца, органов дыхания и желудочно-кишечного тракта с последующим исхуданием до истощения или гибелью животного.

2. Диагноз на анаплазмоз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

Лабораторные исследования на анаплазмоз включают:

- микроскопию мазков крови;

- постановку и учёт реакции длительного связывания комплемента (РДСК) с анаплазменным антигеном;

- биопробу (заражение восприимчивого животного от подозреваемого в заболевании);

- спленэктомию животного в благополучном хозяйстве, подозреваемого в заражении анаплазмами.

В лабораторию для исследования направляют от подозреваемых в заболевании или больных животных тонкие мазки крови из периферических сосудов уха - кончика хвоста или венчика, а также пробы крови из ярёмной вены (v.jugularis)для получения

1-2 мл сыворотки и постановки реакции РДСК. Мазки крови и кровь берут в период развития симптомов болезни, при повышенной температуре, до применения специфической (этиотропной) терапии.

Перед отбором материала у животного шерсть на месте взятия крови выстригают, кожу тщательно протирают спиртом, затем сухим тампоном. Стерильной иглой делают прокол вены ушной раковины (одна игла на каждое животное) или ножницами надрезают край верхушки уха или хвоста (ножницы тщательно вытирают от крови и обрабатывают этиловым спиртом). К свободно выступившей капле крови легко прикасаются поверхностью сухого обезжиренного стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают за рёбра пальцами левой руки в горизонтальном положении. Шлифованным краем другого предметного или покровного стекла прикасаются к капле крови. Как только кровь равномерно распределится по ребру этого стекла, им быстро проводят по поверхности предметного стекла справа налево под углом 45 градусов. Ширина мазка должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут свежую каплю крови. От одного животного готовят по два мазка.

При исследовании большого поголовья животных, содержащихся в приспособленных (нетиповых) помещениях при безпривязном содержании, проще и надёжнее брать кровь из шейной вены одновременно для приготовления мазков и получения сыворотки.

Кровь для приготовления мазков берут в пробирки, содержащие жидкий или в порошке гепарин (из расчёта 3-5 МЕ/мл крови ), в другие пробирки - кровь для получения сыворотки.

Мазки из гепаринизированной крови готовят в лабораторных условиях в день её взятия. Готовые мазки крови высушивают на воздухе, подсушивать их над пламенем или на солнце нельзя. В холодное время года их делают в тёплом помещении или на стёклах, подогретых на крышке стерилизатора. Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкие, равномерные, достаточной длины и заканчиваться за 0,5-1,0 см от края предметного стекла.

Кровь для получения сыворотки ставят на один час в термостат (Т +37 град.С) или в другое тёплое место. После полной ретракции сгустка его отделяют от стенок пробирки, обводя вокруг тонкой стерильной металлической спицей, и ставят в тёмное (прохладное ) место для отстаивания сыворотки. Для исследования используют сыворотку без следов гемолиза эритроцитов.

На высушенных мазках крови в левой части мазка карандашом пишут номер и дату приготовления мазка. Аналогичную запись делают на пробирке с сывороткой крови.Материал от павших или вынужденно убитых животных отбирают до наступления трупного окоченения.

Мазки упаковывают в чистую пергаментную или другую непористую бумагу, складывая их попарно так, чтобы мазки располагались на противоположных (наружных) сторонах стёкол.

Сыворотки крови сливают после их полного отстаивания в пробирки Флоринского, плотно закрывая их резиновыми пробками.

Упакованные материалы - мазки крови и сыворотки доставляют в лабораторию в день приготовления.

3. Микроскопическое исследование.

Мазки крови фиксируют одним из способов: метиловым спиртом в течение 3-5 минут, этиловым спиртом (96 град.) -20-25 минут или смесью этилового спирта и серного эфира в равных количествах -15-20 минут. После высушивания мазки крови окрашивают азур-эозином по Романовскому -Гимза (краску разводят дистиллированной водой рН 7,0-7,2 в соотношении 1:10) -30-45 минут ( в зависимости от качества краски и температуры помещения), промывают дистиллированной водой до исчезновения следов краски на фильтровальной бумаге, высушивают и исследуют под иммерсионной системой микроскопа (х 90). Качество окрашивания мазка определяют по окрашиванию лейкоцитов. Если лейкоциты бледно окрасились или не окрасились - исследовать препарат бесполезно, необходимо применить другую серию краски.

Анаплазмы окрашиваются в тёмно-красный цвет, имеют округлую, овальную форму (похожи на точки), расположены преимущественно ( до 80% и более) по перефирии эритроцита. Размеры паразита от 0,2 до 1,2 микрона.

Степень поражённости эритроцитов бывает различной - от незначительной ( единичные анаплазмы) до 50% и более заражённых эритроцитов (последнее у спленэктомированных животных).

4. Дифференциальная диагностика анаплазм .

В отличие от телец Жолли, расположенных чаще эксцентрично в единичном экземпляре на поверхности эритроцита, анаплазмы мельче и менее интенсивно окрашены. Не следует смешивать анаплазмы с базофильной зернистостью эритроцитов, которая в большинстве случаев проявляется множественностью разнообразных форм включений в одном эритроците. Как правило, тельца Жолли и базофильная зернистость обнаруживаются в молодых эритроцитах, что свидетельствует об омоложении крови и, применительно к анаплазмозу, о благоприятном исходе заболевания.

В местностях, неблагополучных по тейлериозу, пироплазмозу, бабезиозу и лептоспирозу, анаплазмоз необходимо дифференцировать от них. Нередко анаплазмоз проявляется вслед за этими болезнями и осложняет их. При дифференциации необходимо учитывать морфологию возбудителя.

При анаплазмозе, в отличие от других кровепаразитарных болезней, отсутствует кровая моча и в большинстве случаев желтушность видимых слизистых оболочек, несмотря на очень значительное уменьшение количества эритроцитов ( до 1,5 млн. в 1 куб.мм); подъём температуры у животных проявляется в виде лихорадки постоянного или перемежающегося типа, аппетит сохранён до конца болезни, но животные сильно худеют, часто до полного истощения.

За анаплазмы можно принять и различные включения непаразитарной природы - артефакты (остатки краски, загрязнения от неполностью обезжиренного стекла, изменения протоплазмы эритроцита от некачественного фиксатора и пр.). В этих случаях необходимо внимательно манипулировать микровинтом: если это артефакты различной природы и происхождения, то они, как правило, лежат в разных плоскостях с эритроцитом ( эритроцит виден отлично, а включения исчезают и наоборот). Поэтому правильно приготовленный и хорошо окрашенный мазок, без загрязнений - залог успеха в микроскопической диагностике.

5. Оценка результатов исследования.

Результат исследования считают положительным при обнаружении в мазке крови анаплазм. При небольшой паразитомии результат выражают в количественном отношении, то есть подсчитывают количество обнаруженных анаплазм в 100 полях зрения микроскопа ( например: 5 анаплазм в 100 п.зр.)

При значительной степени паразитемии результат выражают в процентном отношении, то есть подсчитывают количество поражённых эритроцитов в различных участках мазка и вычисляют по формуле:

А х 100

----------------

В х С , где

А - количество поражённых эритроцитов,

В - количество эритроцитов в одном поле зрения,

С - количество просмотренных полей зрения.

Например: 750 х 100

---------------- = 12,5 %

120 х 50

В сомнительных случаях в лаборатории ставят РДСК по общепринятой методике.

Адрес для запроса документации и справок: 238311 Калининградская область, посёлок

Б. Исаково, ул. Советская,8

тел. (0112) 46-14-56