ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Метод предназначен для количественного определения окислитель­но-антиокис-лительного баланса между липопротеинами низкой плот­ности (ЛПНП) и липопро-теинами высокой плотности (ЛПВП) плазмы крови, по определению содержания в них первичных продуктов перекисного окисления липидов - гидроперекисей.

Принцип метода заключается в том, что с помощью индуцированной пероксидом водорода хемилюминесценции, в присутствии избытка ио­нов двухвалентного железа, определяют содержание гидропереки­сей в ЛПНП и ЛПВП и их соотношение, которое определяет окислительно-антиокислительный баланс между этими липопротеинами. Из­менение этого соотношения свидетельствует об изменении метабо­лизма липопротеинов с большей специфичностью, чем изменение соотношения холестерола липопротеинов плазмы крови.

Определение состоит из двух этапов: выделения липопротеинов из плазмы и непосредственное измерение интенсивности хемилюминесценции в выделенных липопротеинах.

В центрифужную пробирку вносят 1 мл исследуемой плазмы, 0,2 мл раствора гепарина (1000 ЕД/мл), 0,25 мл1mраствора хлорида марганца и инкубируют на льду в течение 30 мин. Затем пробу центрифугируют при 1500 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жид­кость, содержащую ЛПВП, отделяют отсасыванием, а осадок, содер­жащий ЛПНП, растворяют в 1 мл 2 М раствора сульфата аммония.

После разделения в каждой фракции определяют интенсивность хемилюминес-ценции за 60 с на хемилюминометре следующим обра­зом: в кювету хемилюминометра вносят 0,2 мл фосфатного буфера, РН 4,2; 0,1 мл исследуемой фракции липопротеинов и 0,4 мл 0,28%-го раствора сульфата железа (ii). В последнюю очередь добавля­ют 0,2 мл3%-roраствора пероксида водорода, и сразу же измеря­ют сумму хемилюминес-ценции за 60 с, как наиболее информативный показатель.

Расчет окислительно-антиокислительного баланса липопротеинов плазмы крови производятпо следующей формуле

где:ДК - диагностический коэффициент значения окислительно-антиокислительного

балансалипопротеинов плазмы крови.В норме он меньше 1,5 .

ХЛ -ЛПВП - сумма интенсивности хемилюминесценции ЛПВП за60 с;

ХЛ-ЛПНП - сумма интенсивности хемилюминесценции ЛПНПза60 с.

Нарушение окислительно-антиокислительного баланса липопротеинов плазмы крови отмечается при заболеваниях печени, почек, эндокринных органов, при этом изменение окислительно-антиокислительного баланса между липопротеинами крови является более специфичным и информативным показателем, чем изменение холестерола этих липопротеинов при многих заболеваниях, связанных с нарушением метаболизма липопротеинов. Поэтому метод позволяет улучшить диагностику возможных забо­леваний у животных, что в конечном итоге имеет значение для сохра­нения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.