ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Способ основан на прямом флуориметрическом определе­нии витамина Е (альфа-токоферола), экстрагированного из эритроцитарных мембран гексаном, при длине волны 320 - 325 нм, с дли­ной возбуждающего света 292 нм. Одновременно в эритро-цитарных мембранах определяется содержание общего белка.

Трижды отмытые в двукратном объеме физиологического раствора эритроциты разводят в 2 раза физиологическим раствором, и к 0,25 мл полученной эритроцитарной взвеси добавляют 0,25 мл 25%-й ас­корбиновой кислоты, 1 мл фосфатного буфера рН 7,4 и 0,5 мл этанола в пробирках на 5 мл с притертыми пробками. После этого пробы про­гревают в течение 5 мин. на водяной бане при температуре 70°С и добавляют 0,5 мл 10 н. КОН для омыления вновь прогревают 30 минут на водяной бане при темпе-ратуре 70°С и охлаждают на льду. Затем добавляют 2,0 мл гексана и встряхивают 20 мин. После расслоения в холодильнике, измеряют флуоресценцию гексановой фазы при длине волны 320-325 нм, с длиной возбуждающего света 292 нм. Аналогично обрабатывают контрольную пробу, вместо эритроцитарной взвеси берут 0,25 мл фосфатного буфера, РН 7,4.

Параллельно в эритроцитарной взвеси определяют содержание общего белка эритроцитарных мембран, для чего к 0,1 мл эритроцитарной взве­си добавляют 0,5 мл дистиллированной воды, 0,6 мл этанола и встря­хивают 15 мин. Вносят 0,2 мл концентрированной соляной кислоты и центрифугируют 20 мин. при 3000 об/мин. После чего в элюате опре­деляют содержание общего белка биуретовым методом.

Рассчитывают содержание витамина Е (альфа-токоферола) в эритроцитарных мембранах по формуле

где: Е - содержание альфа-токоферола в мкг/мг белка;

А - флуоресценция опытной пробы;

В - флуоресценция контрольной пробы;

С - флуоресценция стандартного раствора альфа-токоферола;

d-концентрация общего белка эритроцитарных мембран в пробе в мг/мл;

50 - концентрация стандартного раствора альфа-токоферола (50 мкг/мл).

Снижение содержания витамина Е (альфа-токоферола) в эритроцитарных мембранах отмечается при заболеваниях печени, почек и ха­рактеризует недостаточную функцию антиоксидантной системы организма животных.

Способпозволяет улучшить диагностику возможных забо­леваний у животных, что в конечном итоге имеет значение для сохра­нения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.